绝对荧光定量pcr结果计算
绘制标准曲线
首先根据公式,计算出标准品曲线的x值(拷贝数),需要修改的数值是标准品质粒浓度(图上的321)和4565(基因片段长度),得出的结果单位是拷贝数/μl。
根据计算结果,可以列出表格,样品倍比稀释到-11稀释度时,拷贝数为0.27(取log),那么-10的时候,就是1.27,以此类推。
以计算出来的0.27、1.27、2.27...等为x轴,对应稀释度的ct值为y轴,则可以绘制出标准品曲线(至少五个点,即测5个稀释度来绘制标准品曲线)
计算标准品曲线公式
将上述x值和y值输入excel,可得标准品曲线对应的函数公式,r^2为相关性系数,一般大于0.99,认为该标准品曲线比较可信。
反推样品拷贝数
最后,将样品的ct值当作y值代入公式,则可以反推出x值,这个x值就是样品中对应基因的拷贝数。