酵母单杂交（Y1H）文库构建与互作蛋白筛选服务

       酵母单杂交（Yeast One-Hybrid, Y1H）是在真核酵母胞内开展实验、用于鉴定蛋白质与特定 DNA 序列（启动子、增强子、沉默子等顺式作用元件）相互作用的经典有力工具，广泛用于转录调控机制解析、新转录因子挖掘。

       该体系依托拆分后可功能互补的 GAL4 转录因子搭建，GAL4 包含两个独立功能结构域：DNA 结合域 BD、转录激活域 AD。实验设计上，将目标顺式 DNA 序列（Bait 诱饵序列）与 GAL4-BD 融合；候选蛋白 cDNA 文库（Prey 猎物文库）与 GAL4-AD 融合。两套载体共转化至酵母细胞内共同表达，若文库中的某一蛋白可以特异性结合诱饵 DNA 序列，就会把 AD 招募至 BD 附近，重新组装形成具备完整转录活性的 GAL4 转录因子，进而启动下游 LacZ 等报告基因表达。在添加 X-gal 的筛选平板上，阳性酵母菌落会显现蓝色，借此即可直观筛选、鉴定和目标 DNA 发生互作的蛋白。

 图1 酵母单杂交技术原理

       在基因转录调控研究中，研究者常常关注启动子、增强子、沉默子这类顺式作用元件，寻找能够结合该 DNA 片段、调控下游基因转录表达的未知蛋白，而酵母单杂交正是适配该类研究需求的核心技术。

    泰克生物依托成熟的 SMART 技术构建高质量酵母 cDNA 文库，文库库容可达 10⁷–10⁸，文库插入率、序列多样性均高于 90%，保障筛选的覆盖度，大幅降低假阴性风险。我们可提供从诱饵载体构建、cDNA 文库构建、酵母单杂交文库筛选，到后续阳性克隆测序、基因合成、亲和力验证的一站式完整技术服务。客户仅需提供待研究的顺式元件 / 启动子 DNA 序列、文库类型需求及样本信息，泰克生物技术团队即可定制专属实验方案，高效助力科研人员挖掘靶向互作蛋白、发现新型转录因子，解析基因上游转录调控网络。