酵母双杂交（核系统）服务｜核内蛋白互作挖掘与文库筛选

一、技术原理

       酵母双杂交核系统与酵母单杂交技术原理相近，均在细胞核内完成互作检测；和膜酵母双杂交（Split-Ubiquitin）不同，核系统依靠核定位信号，将待测蛋白富集于酵母细胞核内开展验证。
       GAL4 转录激活因子包含两个独立功能结构域：DNA 结合结构域（DNA-BD）与转录激活结构域（AD）。两个结构域可各自独立存在，仅当两个待测蛋白发生相互作用时，会带动 BD 与 AD 在空间上靠近，重构完整 GAL4 转录激活活性，驱动下游报告基因转录，以此判断蛋白之间是否存在相互作用。该 GAL4 报告体系同样可应用于酵母单杂交与核体系酵母双杂交实验。

二、核心服务内容

    泰克生物酵母双杂交（核系统）平台覆盖多类实验需求：

1. 已知蛋白一对一蛋白互作验证
2. 靶蛋白自激活转录活性预实验验证
3. cDNA 文库构建与高通量文库筛选，发掘潜在全新互作蛋白

注：膜蛋白 - 膜蛋白、膜蛋白 - 胞质蛋白互作推荐选用膜酵母双杂交 Split-Ubiquitin 系统

 图2 核蛋白酵母双杂交系统流程图

       平台可承接酵母双杂交 cDNA 文库、多肽文库构建，文库库容可达 10⁷~10⁸，文库插入片段阳性率、文库多样性均可达到 90% 以上，高标准满足科研筛选需求。

三、一站式配套服务

        泰克生物建立了基于酵母双杂交的核蛋白互作验证平台、膜蛋白和胞质蛋白互作验证平台、酵母双杂交cDNA文库构建与筛选平台（可发现众多天然的、潜在的互作蛋白）。泰克生物构建的酵母双杂交cDNA文库/多肽文库的库容可达10^7-10^8，文库多样性、插入率均可达90%以上，满足各类客户对于酵母双杂交文库的质量要求。同时，泰克生物还能提供酵母双杂交文库构建与筛选的配套的下游表达验证和亲和力测定验证等一站式技术服务，客户只需要提供具体的靶蛋白序列信息、需要构建的文库种类以及样本信息，泰克生物的科学家均能够根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制，助力客户的科研项目。