PBMC 分离服务：免疫研究与抗体发现的上游基础支撑

       外周血单个核细胞（PBMC）包含淋巴细胞（T/B/NK 细胞）、单核细胞、树突状细胞等，是免疫学基础研究、单 B 细胞筛选、细胞功能验证、CAR-T 及抗体药物研发最核心的起始样本。PBMC 分离服务，就是从抗凝全血、白膜层或 Leukopak 单采样本中，标准化完成单个核细胞提取、纯化、质控，可交付新鲜或冻存 PBMC，支撑下游各类免疫与抗体开发实验。

一、核心分离原理

       行业主流方案为Ficoll 密度梯度离心法，利用血液中不同细胞密度差异实现分层。人源 Ficoll 分离液密度 1.077 g/mL，红细胞、粒细胞密度大于 1.077 g/mL，离心后沉降至管底；PBMC 密度略低于分离液，富集在血浆与分离液之间，形成一层云雾状白膜层，收集该层细胞，经多次洗涤去除血小板、杂质，获得 PBMC 样本。
也可采用 SepMate 分离管、CPT 采血管等改良体系，简化铺样操作，缩短分离时间，降低人为操作带来的批次差异。

二、标准化服务流程

1. 样本接收与评估：接收肝素抗凝全血、白膜层、Leukopak 单采样本，核查抗凝状态、样本采集时效，剔除凝块、溶血不合格样本。
2. 样本稀释与铺层：无菌条件下 PBS 稀释血液，沿管壁缓慢叠加于 Ficoll 分离液上层，保证两层界面不混合。
3. 水平离心分层：无刹车控温离心，依靠密度差异完成细胞分层。
4. 白膜层收集与洗涤：小心吸取 PBMC 云雾层，多次洗涤去除血小板、残留红细胞与分离液。
5. 质控检测：台盼蓝染色检测细胞活率，细胞计数，检测支原体、细菌真菌污染，评估细胞纯度。
6. 样本交付：可选择新鲜细胞悬液交付，或程序降温冻存，液氮保存交付冻存细胞。

三、关键质控指标

• 细胞活率：常规≥90%；优质样本可稳定＞95%
• 细胞纯度：单个核细胞占比高，红细胞、粒细胞污染控制在低水平
• 微生物检测：支原体、细菌、真菌阴性
• 可按需提供流式表型检测，评估 T、B、NK 细胞亚群比例

四、核心应用场景

1. 单 B 细胞抗体开发：免疫动物 / 康复患者外周血 PBMC 是抗原特异性 B 细胞的原料，用于后续 FACS、微流控单细胞分选，是纳米抗体、全人源单克隆抗体发现的上游基础实验。
2. 细胞功能体外验证：细胞杀伤实验、T 细胞活化、细胞因子分泌检测，用于抗体、ADC、免疫检查点分子功能评价。
3. 免疫基础研究：免疫应答机制、疾病免疫图谱、免疫标志物筛选。
4. 细胞治疗研发：CAR-T、CAR-NK、基因编辑细胞的起始样本制备。
5. 疫苗评价：检测疫苗诱导的机体免疫细胞应答水平。

五、技术优势与局限性

  优势

1. 标准化操作，减少实验室自建方案带来的人员操作误差，保证批次稳定性。
2. 适配多种样本类型：全血、白膜层、Leukopak，可满足小规模科研到大规模药物研发项目。
3. 灵活交付模式：新鲜 PBMC 适合立即开展分选与细胞功能实验；冻存 PBMC 便于样本集中检测、多批次平行试验。
4. 可拓展下游服务：PBMC 基础上继续完成 MACS 磁珠分选、流式分选，进一步获取 CD3、CD4、CD8、B 细胞等特定免疫亚群。

  局限性

1. 样本时效性要求高，采血后放置过久会造成细胞凋亡，活率显著下降。
2. 传统 Ficoll 操作对铺层、离心刹车控制要求严格，操作不当会造成 PBMC 大量损失、纯度下降。
3. PBMC 是混合免疫细胞群，若需单一亚型，需要额外增加细胞分选步骤。
4. 冻存复苏过程会带来一定比例细胞损失，复苏后活率会低于分离即时活率。

六、小结

       PBMC 分离是免疫实验、单 B 细胞抗体筛选、免疫细胞功能验证的上游关键环节，细胞活率、纯度直接决定下游实验成败。标准化 PBMC 分离服务，依托成熟的密度梯度离心工艺与完善质控体系，稳定提供高质量单个核细胞样本，支撑从抗体发现、体外功能验证到细胞治疗、疫苗研发等生物医药管线。泰克生物具有成熟的动物免疫技术和PBMC分离技术，保证细胞分离过程中不受损害、不被刺激，后期的纯化技术保证骆驼单个核细胞的纯度以及活率等技术指标，适用于后期的细胞培养、抗体制备等其他研究。