酵母单杂交（Y1H）：解码 DNA - 蛋白互作的真核筛选技术

        酵母单杂交（Yeast One-Hybrid, Y1H）是在真核酵母细胞内研究蛋白质与特定 DNA 序列相互作用的经典技术，尤其适用于鉴定与启动子、增强子、沉默子等顺式作用元件结合的转录因子或调控蛋白，是基因表达调控机制研究的核心工具。

一、酵母单杂交基本原理

    酵母单杂交系统的核心，利用转录因子 GAL4 两个可独立发挥功能的结构域：

• DNA 结合结构域（BD）：与目标 DNA 顺式作用元件（Bait）融合；
• 转录激活结构域（AD）：与 cDNA 文库蛋白（Prey）融合。

    实验中，将构建好的AD-cDNA 文库载体与BD-DNA 诱饵载体共转化酵母。若文库中某一蛋白能特异性结合目标 DNA 序列，就会将 AD 结构域招募至 BD 附近，重构出具有完整功能的 GAL4 转录因子，进而激活下游报告基因（如 LacZ）表达。在含 X‑gal 的筛选平板上，阳性克隆会呈现蓝色菌落，从而直观、快速地筛选出与目标 DNA 互作的蛋白质。

二、适用实验类型

    酵母单杂交技术主要适用于以下几类研究：

• 验证已知 DNA 序列与未知蛋白是否存在相互作用；
• 发现并鉴定结合于启动子 / 增强子等顺式作用元件的新转录因子 / 新功能基因；
• 对已验证的 DNA 结合蛋白，精确定位其 DNA 结合结构域；
• 分析并鉴定蛋白在 DNA 上的特异性结合碱基序列。

三、泰克生物 Y1H 文库构建与一站式服务

       泰克生物采用改进 SMART 技术构建高质量 cDNA 酵母单杂交文库，库容可达 10⁷–10⁸，插入率与序列多样性均＞90%，为高成功率筛选提供可靠基础。依托成熟的技术平台，可提供从文库构建到筛选验证的一站式服务：客户只需提供待研究的顺式作用元件 / 启动子序列、样本类型及研究目标，即可完成诱饵载体构建、cDNA 文库构建、酵母共转化、高通量筛选、阳性克隆测序与生物信息学分析，并可配套提供基因合成、蛋白表达、亲和力测定等下游验证实验，实现个性化方案设计，助力新转录因子与靶向互作蛋白的高效发现。