凝血酶适配体筛选新方法：PEG 水凝胶一步富集，无需阴性筛选

       在生物分子研究中，适配体（能精准结合靶标的核酸分子）是疾病诊断与治疗的重要工具，但传统筛选方法（如 SELEX）流程繁琐，还需多轮阴性筛选消除背景干扰。近期，基于大孔 PEG 水凝胶的 HAS（结合 - 扩散筛选）方法实现突破 —— 仅一步就能从适配体库中筛选出抗凝血酶的适配体，靠 PEG 抗污特性和扩散调控，既简化流程又降低干扰，为适配体筛选提供新路径。

一、实验设计：水凝胶 + 凝血酶，搭 “特异性筛选平台”

HAS 方法的核心是让适配体在扩散中主动结合靶标，实验分三步：

1. 建筛选体系：把凝血酶（靶分子）固定在大孔 PEG 水凝胶中，PEG 做惰性基质提供扩散通道，凝血酶则当 “捕获器” 结合适配体；
2. 加载适配体库：先将水凝胶部分脱水，再加入 N40 适配体库（含大量随机核酸序列），水凝胶复形后，适配体库进入内部孔隙；
3. 扩散与收集：水凝胶浸在筛选缓冲液中孵育，能结合凝血酶的适配体被 “滞留”，其余随缓冲液释放。按 6h、24h、60h 收集缓冲液，用凝胶电泳和紫外吸收分析。

二、关键优势：PEG 抗污，告别 “背景干扰”

传统筛选中，适配体易与基质非特异性结合，需多轮阴性筛选去除干扰。而 HAS 方法靠 PEG 的抗污特性，从源头解决问题：

• 空白实验（无凝血酶的 PEG 水凝胶）显示，60h 时适配体保留率近 0%，说明 PEG 几乎不与适配体非特异性结合；
• 对比固定凝血酶的水凝胶，其适配体保留量显著更高，证明滞留是因与凝血酶特异性结合，无需阴性筛选就能确保 “真阳性”。

三、筛选细节：60h 是 “黄金时间”，靶标浓度要够

1. 选 60h 收集：早期（6h、24h）收集的适配体库，与凝血酶结合信号弱（未有效富集）；60h 时，适配体库 SPR 信号远强于原始库，且背景干扰已消失，是最佳收集时间；
2. 凝血酶需达 “阈值浓度”：将凝血酶浓度降 10 倍、100 倍后，适配体库结合能力显著下降。说明水凝胶中凝血酶需达阈值浓度，才能形成足够结合位点，实现有效富集。

结语：HAS 方法的价值

       HAS 方法把筛选从多步压缩到一步，缩短周期（传统需数周，HAS 仅 60h）、降低成本，还提升特异性。未来可拓展到肿瘤标志物、病毒蛋白等靶标的适配体筛选，为诊断试剂、靶向药物研发提供高效工具。