DNA | RNA | Protein | 提取 | 纯化 | 定量
这算是wet lab实验室最为基本的技能了。
基因克隆,从Ecoli里提取质粒,不要忘了加RNase,否则在做gateway cloning的时候RNA会抑制LR反应。
不同用途的实验对DNA、RNA、Protein的纯度要求是不一样的,这你要自己去摸索,比如普通Lentivirus packaging,Plasmid里混杂了RNA就没那么重要。
这里先说下DNA和RNA的定量。
A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长
A280nm, A270nm是蛋白最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估
A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:纯 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值为2.5。若比值小于 2.0 标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。
切胶后,A260/280=2,说明无蛋白污染;A260/230=0.2,说明样品被碳水严重污染,
解决办法:用washing buffer(含酒精那个)多洗几遍就好了,亲测有效。用ddH20 elution,不要用NE buff。