中药入血成分分析：结果怎么筛，两套等级怎么分

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中药入血成分分析的结果筛选，需要同时回答两个问题：这个峰是否具有可靠的入血特征，以及它被鉴定成某个具体化合物是否可信。

推荐顺序是先按一、二、三级入血判断样本证据，再将代谢物鉴定 Level 与二级碎片得分联合筛选，再用 Intensity 排除弱信号、仪器噪音和潜在假阳性。

一、为什么要分成两套等级来看

入血等级描述的是峰在中药组、给药血清和空白血清中的分布模式，并不等同于化合物鉴定准确度。

一级、二级、三级入血回答的是"是否符合入血模式"；Level 1、2、3 回答的是"结构鉴定是否可靠"。两者的"三"只是数字上的巧合，必须分开判断。

二、第一步到第二步：先分入血类别，再定鉴定等级

第一步，按入血模式分类。 这一步只用三组样本的分布关系，不涉及任何结构判断。

入血类别	判定条件	结果解释
一级入血	中药组 >0、给药血清 >0、空白血清 =0	优先提示中药原型成分吸收入血
二级入血	三组均 >0 且给药/空白 FC≥2	可能与内源性物质重叠，需重点看组间差异
三级入血	中药组 =0、空白血清 =0、给药血清 >0	可能为体内新生成的代谢物，需排除偶然峰和干扰

第二步，按代谢物鉴定等级筛选。 鉴定 Level 反映具体结构的可信度，主结果优先保留 Level 1 和证据较强的 Level 2，Level 3 适合放入探索性候选表。

能够通过标准品数据库准确匹配一级前体离子、二级碎片及保留时间信息，且一级质量偏差 <10 ppm、二级质量偏差 <25 ppm、保留时间在 ±0.5 min 以内的代谢物，鉴定置信度等级记为 Level 1（Score≥40 或 Fragmentation Score≥50）。

通过公共或商业数据库准确匹配一级前体离子、二级碎片，且一级质量偏差 <10 ppm、二级质量偏差 <25 ppm 的代谢物，记为 Level 2（Score≥40 或 Fragmentation Score≥50）。

鉴定等级	主要证据	使用建议
Level 1	同条件标准品匹配，包括精确质量、保留时间和 MS/MS	高优先级，可作为确证结构
Level 2	公共或商业谱库 MS/MS 匹配，通常缺少同条件标准品	很可能的结构，结合碎片得分进一步排序
Level 3	分子式、碎片规律或化合物类别推断	暂定注释，即使碎片得分较高也不等同于 Level 1

三、落到检测：药材侧与血清侧两条线

江苏三黍生物科技有限公司在这套流程的两端各有一条产品线：中药组样本走中药代谢组学，给药血清与空白血清走中药入血成分分析。

中药代谢组学采用液相色谱-高分辨质谱（LC-MS），结合中药专项化学成分数据库，对中药材及其复方中的复杂化学物质群做系统鉴定与解析。定性由 Progenesis QI 完成，匹配 HMDB、PubChem、METLIN、MassBank 等公共数据库，注释内容覆盖 HMDB、KEGG、ClassyFire 并附二级碎片信息，输出多样化分析图表。这一侧产出的是中药组的化合物参考谱，也就是第一步判定里"中药组 >0"或"中药组 =0"的比较依据。

中药入血成分分析同样基于 LC-MS，匹配 20000 条以上的中药特征代谢物数据库，按 Level 1–Level 3 分级筛选，其中 Level 1 物质 99% 精确匹配；采用"中药—给药—空白"三重交叉验证的方法区分入血成分。每个代谢物附 10 项以上特征参数，含多数据库编号、二级碎片离子、质荷比等，并可输出代谢物与药材归属的溯源结果及药物代谢产物预测。该产品线累计处理中药材样本 30000 例以上。

四、一个容易混淆的关系：综合评分与二级碎片得分

综合评分 Score 是软件根据一级精确质量、同位素特征、加合离子、保留时间和数据库匹配等信息形成的整体分数，适合快速排序和建立候选池。不同软件的计算权重可能不同，因此综合评分高并不等于结构已经确证。

二级碎片得分 Fragmentation Score 反映实验 MS/MS 谱与数据库谱图或理论碎片的匹配程度。分数越高，说明主要碎片、相对强度或中性丢失等信息越吻合，对结构判断更直接。它仍会受到碰撞能量、谱图质量和数据库覆盖度影响。

指标	主要作用	筛选建议
Score	评价整体匹配程度	用于初筛和排序，不能单独作为确证依据
Fragmentation Score	评价 MS/MS 结构证据	结构筛选时优先关注，越高通常越可靠
联合使用	兼顾整体证据和结构证据	正式结果优先要求两项均达标

第三步的做法是：先用鉴定 Level 确定证据上限，再用碎片得分在同一等级内排序。碎片得分不能把 Level 3 提升为 Level 1，只用于确定复核优先级。

组合	优先级	处理方式
Level 1	高	有标准品证据，直接优先保留，同时检查碎片和峰形
Level 2 且碎片得分 ≥50	较高	作为重点候选，得分 ≥70 或 80 时优先人工复核
Level 2 且碎片得分 <50	较低	结构证据偏弱，检查是否缺少有效 MS/MS 或存在同分异构体
Level 3	探索性	保留为暂定注释，不与确证结果混合统计

第四步是用 Intensity 排除弱信号。给药血清中的代表性 Intensity 建议达到 10⁴ 量级以上；低于该量级的峰更容易接近基线噪音，峰提取和积分稳定性较差，也更容易出现仪器噪音、偶然峰或假阳性。需要说明的是，Intensity≥10⁴ 是经验性的质量门槛，不是结构鉴定证据。

五、送样与周期

产品	样本类型	建议样品量	起始样品量
中药入血成分分析	血清、血浆、植物组织、动物组织	动植物组织 >200 mg；血清血浆 >0.2 mL	动植物组织 >100 mg；血清血浆 >0.1 mL
中药代谢组学	植物组织；根系分泌液等液体	植物组织 >200 mg；根系分泌液 >5 mL；发酵液 >0.5 mL	植物组织 >100 mg；根系分泌液 >2 mL；发酵液 >0.2 mL

生物学重复建议 3 次及以上。周期为 20 个工作日（50 个样品以内），超出该数量需另行沟通。样品量低于起始送样量要求，会出现大量低丰度代谢物无法有效检出、组内重复样差异变大的情况。

保存与运输有两条直接关系样本是否报废：一是禁用 2 mL 或 1.5 mL EP 管，防止液氮进入管内炸裂；二是鲜样用足量干冰运输且不能反复冻融。此外尽量避免分批送样，以降低批次效应。含列入中国传染病原微生物名录的样品不接收。

六、常见问题

• 问：二级碎片得分很高，能不能把 Level 3 直接当 Level 1 用？

不能。碎片得分只在同一鉴定等级内决定复核先后，不能提升等级。Level 1 多出的一重证据是同条件标准品匹配的保留时间（±0.5 min），这一项没法用分数替代。

• 问：已经做了中药入血成分分析，为什么还要做中药代谢组学？

一级入血和三级入血的判定都依赖中药组是否检出该峰：中药组 >0 且空白血清 =0，才优先提示原型成分吸收入血；中药组 =0 而给药血清 >0，则可能为体内新生成的代谢物，需排除偶然峰和干扰。中药组这一侧的参考谱由中药代谢组学建立，两份数据是配套使用的。