淼灵共享质粒（二）｜中山大学刘忠钰老师课题组的荧光报告质粒

（平台提示：本文可能是商业推广软文）

中山大学医学院刘忠钰老师课题组将自主构建并经实验验证的7株荧光报告质粒正式分享至淼灵质粒共享平台。

这批载体已应用于课题组在虫媒RNA病毒感染与内质网功能调控领域的研究，相关学术成果发表于《Virology》期刊2025年第603卷（PMID:39754862，DOI:10.1016/j.virol.2024.110374）。

依托淼灵平台的开放共享渠道，这批成熟的实验载体面向全国科研工作者开放获取，帮助同行省去重复构建与验证的时间成本，助力病毒生物学、细胞生物学相关领域研究高效推进。

该系列载体涵盖内质网定位、拆分荧光互补、内质网膜标记、双报告基因等多种类型，是支撑该项研究的主要工具质粒。

在研究中，团队以寨卡病毒（ZIKV）复制子为基础进行插入位点筛选，发现病毒非结构蛋白NS2A的N端对外源肽段插入具有高度耐受性；据此构建了NS2A融合GFP11标签的重组寨卡病毒与登革病毒，搭配本次分享的内质网定位sfGFP1-10系列载体，通过拆分荧光蛋白（splitGFP）互补技术，在活细胞中成功标记并可视化病毒复制细胞器（ReplicationOrganelles,RO）的动态形成过程。

研究证实，黄病毒的RNA复制位点定位于宿主内质网结构；病毒感染进程中，复制细胞器从早期散在的点状结构，逐步融合为核周的大型复制区。借助本次分享的Sec61B-mOrange内质网膜标记载体进行共定位分析，进一步明确了NS2A蛋白的内质网膜定位特性。同时，团队利用这套split荧光报告系统验证了抗病毒化合物对病毒复制的抑制效应，证明该系统可用于抗病毒药物的高通量筛选与作用机制研究。

刘忠钰老师课题组长期聚焦正链RNA病毒的复制调控机制、黄病毒感染致病机制研究，而内质网是黄病毒等多种RNA病毒完成基因组复制、病毒颗粒组装的关键场所。本次分享的系列质粒，正是围绕内质网蛋白定位、蛋白相互作用、双报告基因定量等实验需求构建，可用于准确解析病毒感染过程中内质网的形态重塑、蛋白转运与功能调控，是病毒与宿主互作研究的重要工具载体。

非常感谢中山大学刘忠钰老师课题组对淼灵质粒平台的信任，将自研实验质粒对外公开分享。目前这批质粒已正式上架淼灵质粒平台，供科研工作者采购获取。

本次分享质粒的信息如下：

质粒货号	质粒名称	抗性	感受态	培养温度
P103045	pcDH-Sp-sfGFP1-10-KDEL-Puro	AMP+	Top10	37℃
P102980	pcDNA3.1-Rluc-GFP11X3	AMP+	Top10	37℃
P102981	pcDNA3.1-Sec61B-mOrange	AMP+	Top10	37℃
P102982	pcDNA3.1-sfGFP1-10	AMP+	Top10	37℃
P102983	pcDNA3.1-Sp-Rluc-GFP11×3-KDEL	AMP+	Top10	37℃
P103046	pcDNA3.1-Sp-sfGFP1-10-KDEL	AMP+	Top10	37℃
P102984	pcDNA3.1-Sp-sfGFP-OPT-KDEL	AMP+	Top10	37℃

质粒简介

pcDH-Sp-sfGFP1-10-KDEL-Puro（P103045）

该载体以pcDH慢病毒骨架为基础，携带信号肽（Sp）、sfGFP1-10拆分荧光片段及KDEL内质网滞留序列，搭配嘌呤霉素（Puro）真核筛选标记、氨苄青霉素（Amp）抗性元件。

sfGFP1-10为拆分GFP的N端功能片段，可与GFP11片段互补结合重构完整荧光蛋白，用于蛋白互作、定位示踪等splitGFP实验；KDEL序列可将表达蛋白锚定在内质网腔中，实现内质网蛋白的特异性滞留。

载体既可以直接进行瞬时质粒转染，也能够包装为慢病毒颗粒，侵染原代、干细胞等难转染细胞；结合嘌呤霉素抗性筛选，即可构建稳定表达内质网定位sfGFP1-10的细胞株。

推荐感受态：Top10，培养温度37℃，适合开展内质网功能、蛋白转运、拆分荧光互补相关机制研究。

pcDNA3.1-Rluc-GFP11X3（P102980）

该载体以pcDNA3.1经典真核表达骨架为基础，携带海肾荧光素酶（Rluc）编码序列及3串联GFP11拆分荧光片段，搭配氨苄青霉素（Amp）抗性元件。

GFP11为拆分GFP的C端互补小片段，可与sfGFP1-10特异性结合恢复荧光活性；Rluc可作为报告基因实现精确定量，常用于双报告基因检测、蛋白相互作用验证实验。

载体可直接进行瞬时质粒转染，完成报告基因定量与荧光互补功能验证。

推荐感受态：Top10，培养温度37℃，适合开展双报告基因检测、蛋白互作验证、基因表达定量相关研究。

pcDNA3.1-Sec61B-mOrange（P102981）

该载体以pcDNA3.1经典真核表达骨架为基础，携带Sec61B内质网定位序列及mOrange橙色荧光蛋白编码序列，搭配氨苄青霉素（Amp）抗性元件。

Sec61B为内质网膜固有蛋白，可将融合蛋白特异性锚定至内质网膜结构；mOrange为单体橙色荧光蛋白，亮度高、光稳定性好，可用于活细胞长时间成像示踪。

载体可直接进行瞬时质粒转染，直观观察内质网形态与蛋白亚细胞定位。

推荐感受态：Top10，培养温度37℃，适合开展内质网结构、蛋白定位、分泌通路调控相关研究。

pcDNA3.1-sfGFP1-10（P102982）

该载体以pcDNA3.1经典真核表达骨架为基础，携带sfGFP1-10超折叠拆分荧光蛋白编码序列，搭配氨苄青霉素（Amp）抗性元件。

sfGFP1-10为超折叠GFP的N端大片段，自身无荧光活性，只在与GFP11片段结合后可重构出完整荧光，是拆分荧光互补实验的主要工具载体。

载体可直接进行瞬时质粒转染，与携带GFP11的靶标质粒共转染，验证蛋白互作与共定位情况。

推荐感受态：Top10，培养温度37℃，适合开展拆分荧光互补、蛋白相互作用、蛋白定位示踪相关研究。

pcDNA3.1-Sp-Rluc-GFP11×3-KDEL（P102983）

该载体以pcDNA3.1经典真核表达骨架为基础，携带信号肽（Sp）、海肾荧光素酶（Rluc）、3串联GFP11拆分荧光片段及KDEL内质网滞留序列，搭配氨苄青霉素（Amp）抗性元件。

信号肽引导蛋白进入分泌通路，KDEL序列将蛋白稳定滞留于内质网；多拷贝GFP11可提升荧光互补实验的信号强度，结合Rluc可实现双报告基因定量检测。

载体可直接进行瞬时质粒转染，用于内质网定位的双报告基因检测与荧光互补实验。

推荐感受态：Top10，培养温度37℃，适合开展内质网功能、分泌通路、双报告基因定量相关研究。

pcDNA3.1-Sp-sfGFP1-10-KDEL（P103046）

该载体以pcDNA3.1经典真核表达骨架为基础，携带信号肽（Sp）、sfGFP1-10拆分荧光片段及KDEL内质网滞留序列，搭配氨苄青霉素（Amp）抗性元件。

信号肽引导融合蛋白进入内质网分泌通路，KDEL序列实现蛋白内质网的特异性滞留；sfGFP1-10可与GFP11片段互补产生荧光，用于内质网蛋白的定位与互作研究。

载体可直接进行瞬时质粒转染，完成内质网定位的拆分荧光相关实验。

推荐感受态：Top10，培养温度37℃，适合开展内质网蛋白定位、蛋白转运、拆分荧光互补相关研究。

pcDNA3.1-Sp-sfGFP-OPT-KDEL（P102984）

该载体以pcDNA3.1经典真核表达骨架为基础，携带信号肽（Sp）、密码子优化型（OPT）超折叠sfGFP编码序列及KDEL内质网滞留序列，搭配氨苄青霉素（Amp）抗性元件。

密码子优化的sfGFP在哺乳动物细胞中表达效率更高、荧光亮度更强；信号肽引导蛋白进入分泌通路，结合KDEL序列可实现融合蛋白的内质网稳定滞留与高亮示踪。

载体可直接进行瞬时质粒转染，用于内质网形态观察与蛋白定位示踪。

推荐感受态：Top10，培养温度37℃，适合开展内质网结构示踪、蛋白亚细胞定位、分泌通路调控相关研究。

这批载体均经过课题组细胞水平的功能验证，序列准确、荧光表达稳定、定位效果明确，科研人员获取后可直接用于转染实验、荧光成像、蛋白互作验证等研究，无需再从零完成载体设计、构建与功能验证的全流程，大幅缩短实验准备周期。

共享的价值与意义

课题组选择将自研质粒分享至淼灵质粒平台，既是对平台标准化质检体系与专业服务的认可，也希望通过开放共享的方式，让成熟的实验工具流动起来，惠及更多研究团队。尤其是针对病毒感染与内质网互作这一细分研究方向，这批经过实验验证的定位、报告载体，能够为同行提供可靠的工具支撑，共同推动领域研究进展。

淼灵的科研质粒共享计划

淼灵质粒平台长期欢迎各高校、科研院所课题组分享已构建并验证的质粒载体。

分享者所提交质粒经质检合格后将收录至淼灵现货库，供更多科研工作者调取使用，助力分子生物学资源的开放共享与科研效率提升。

如果您所在课题组有质粒分享意向，欢迎提交载体资料与菌株到平台相关负责人处，我们将协助完成后续质检及上架全流程。