激光共聚焦显微镜操作要点

开机：12345注：30min内不要反复开关，电脑开机。

打开电脑，运行ZEN软件（黑色），点击ZEN system

物镜界面：触屏选择10×，手轮来调节焦距。

目镜下看：点击locate，再点击BF、绿光、红光

用眼睛观察，找视野，找到样品并且视野清晰

点击光的类型（如GFP），继续移动样品杆找到想要观察的对象。

电脑控制界面

点击acquisition下的smart setup

添加通道：gfp,mcherry

左侧：荧光范围,明场打勾                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              右侧像素信息设置：

Phihole:1AU

荧光参数：

Master gain （500-800）

Digital offset:0

Digital gain:1

点击live进行图像实时采集，图像显示出来了。

过爆：range indicator

minmax

调整：gain+激光强度488nm

stop结束

调节分辨率：confocal

点击snap进行图像的获取

split

设置标尺。 Graphic-选择小尺子-双击左侧Annotations颜色改尺寸

Crop area -live预览-snap拍照reset回到原来的大小保存为czi格式，保存到个人的文件夹中。另外，还可再导出一份tiff格式

File-Export/Import-Export

界面Methold-Image Export

File type-tiff jpg

Burn in graphic:文件的标尺一起导出。

Merged、Individual channels image （单通道）打勾 Apply

关机：54321

 

准备物品

卫生纸、水、枪头、枪、剪刀、载玻片、盖玻片