卡梅德生物｜PBMC 外周血单个核细胞分离，Ficoll 法实验实操笔记

外周血单个核细胞（PBMC）主要由淋巴细胞、单核细胞构成，是免疫相关实验、细胞培养、流式检测、分子实验中十分关键的基础样本。Ficoll 密度梯度离心是科研实验室常用的分离方案，利用不同血细胞的密度差异完成细胞分选。做好样本管控与参数设置，即可获取质量稳定的 PBMC，下面整理实验的核心实操要点。

实验分离基本原理

Ficoll 分离液选用 1.077g/mL 规格，常温环境下密度保持稳定。红细胞与粒细胞密度高于分离液，离心之后沉降至管底；PBMC 密度略低于分离液，富集在血浆与分离液的交界面，形成肉眼可见的白膜层；血小板、血浆成分留存于上层，以此实现各类血细胞组分的分离。

实验前期准备工作

试剂准备 Ficoll 分离液、无钙镁 PBS 缓冲液，搭配无菌离心管、巴氏吸管等耗材；仪器需要可控温低速离心机、超净工作台。样本优先采用 EDTA 抗凝新鲜外周血，尽量采血后 6 小时内完成处理，规避溶血、含有凝块的样本。试剂和样本需要回温至 20‑22℃，温度发生变化会改变分离液密度，直接干扰分层效果。

核心操作以及质控指标

抗凝全血与 PBS 按照 1:1 比例轻柔颠倒混匀，将稀释后的血液缓慢铺在 Ficoll 分离液上层，保证两层液体界面完整。离心条件设置 20℃、650‑700g，30min，梯度离心阶段需要关闭制动，防止分层被破坏。收集白膜层细胞，PBS 洗涤两次去除残留分离液，重悬后开展台盼蓝染色计数；合格样本细胞活率≥90%，纯度≥85%。

常见问题处理与样本保存

分层不清晰、细胞得率低、细胞活性下降，大多是样本存放超时、温度波动、操作手法不当引发，严格遵循实验条件能够减少这类问题。分离后的 PBMC 建议尽快开展实验；短期可 4℃冷藏；长期保存需要梯度降温后存放于液氮。面对样本制备方面的难题，卡梅德生物可以提供细胞分离、样本预处理、细胞质控等相关技术服务，帮助科研人员降低实验试错成本。