ATCC 13124 产气荚膜梭菌：厌氧菌质控与食品检测的标准模式菌株

关键词：ATCC 13124、产气荚膜梭菌、厌氧培养质控、GB 4789.28、ISO 7937、培养基验证、毒素A型模式菌株

一、菌株基本信息

  • ATCC编号：13124
  • 菌种名称：产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）
  • 原始编号：Veillon and Zuber, Hauduroy et al.
  • 分离来源：人类临床标本
  • 革兰氏反应：阳性（G+，但老龄培养物可转为阴性）
  • 形态：大杆菌，无芽孢（在体内条件下），但体外营养缺乏时可形成芽孢
  • 毒素型：A型（产α毒素/磷脂酶C）
  • 生物安全等级：BSL-2
  • 基因组测序：已完成全基因组测序
  • 保藏机构：ATCC（美国典型培养物保藏中心）
  • 模式菌株：是（Clostridium perfringens的模式菌株）

二、标准中的定位

ATCC 13124 是厌氧菌质控和食品检测领域的重要标准菌株，在以下标准中被明确指定：

2.1 中国标准

  • GB 4789.28-2013：《食品安全国家标准 培养基和试剂的质量要求》：厌氧选择性培养基质控指定该菌株
  • GB/T 4789.13-2003：《食品卫生微生物学检验 产气荚膜梭菌检验》：阳性对照参考菌株

2.2 国际标准

  • ISO 7937:2004：（食品中产气荚膜梭菌计数方法）：质控菌株参考
  • ISO 6887-2：（食品微生物学——样品制备初始悬液：肉及肉制品）：厌氧菌检验参考

2.3 培养基性能验证

依据GB 4789.28和ISO标准，ATCC 13124在以下培养基上的质控要求：

  • 培养基：质控要求
  • TSC琼脂（胰酪胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂）：黑色菌落生长
  • SPS琼脂（亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂）：黑色菌落
  • 厌氧血琼脂：典型双溶血环（内环β溶血，外环α溶血）
  • CCFA培养基：典型菌落生长
  • 厌氧系统的厌氧环境验证：培养生长确认厌氧条件有效

三、厌氧菌质控中的应用要点

3.1 厌氧培养环境验证

ATCC 13124 是验证厌氧培养系统有效性的首选菌株之一：

  1. 厌氧罐/厌氧箱验证：将ATCC 13124接种厌氧血琼脂，放入厌氧环境中培养；同时设需氧对照平板（放在常规大气中）
  2. 判定标准：厌氧环境中生长良好+需氧对照不生长 = 厌氧系统合格
  3. 培养条件：35~37℃，厌氧条件（80% N₂、10% H₂、10% CO₂），24~48h

3.2 Nagler反应

ATCC 13124（A型产气荚膜梭菌）产α毒素（磷脂酶C），可引起特征性Nagler反应：

  • 在含卵黄乳液的琼脂上，菌落周围出现乳白色浑浊环（卵磷脂分解）
  • 抗α毒素血清可抑制此反应（Nagler试验阳性）

这是产气荚膜梭菌快速鉴别的经典方法。

3.3 双溶血环特征

ATCC 13124在血平板上呈现独特的双溶血环：

  • 内环：β溶血（完全溶血），由θ毒素引起
  • 外环：α溶血（不完全溶血），由α毒素/磷脂酶C引起

这一特征可区别于其他梭菌属（如肉毒梭菌仅单一溶血或不溶血）。

3.4 食品中产气荚膜梭菌检测

依据标准方法，食品样品中产气荚膜梭菌的检测流程：

  1. 样品稀释后接种TSC琼脂
  2. 厌氧条件下37℃培养18~24h
  3. 计数黑色菌落（亚硫酸盐还原菌落）
  4. 纯化后确认：Nagler反应、动力阴性、芽孢极少、stormy fermentation（暴烈发酵）

3.5 Stormy Fermentation（暴烈发酵）

ATCC 13124在乳糖培养基中产生暴烈发酵现象：

  • 大量产气，将培养基凝固物冲碎成碎片状
  • 这是产气荚膜梭菌的经典鉴别特征

四、培养与保藏技术要点

4.1 常规培养条件

  • 培养基：ATCC Medium 2107（厌氧增菌肉汤）、硫乙醇酸盐流体培养基、厌氧血琼脂
  • 培养温度：35~37℃
  • 培养时间：24~48h
  • 气体条件：严格厌氧（80% N₂、10% H₂、10% CO₂）

4.2 复苏操作

  1. 在厌氧条件下，吸取0.5mL推荐增菌肉汤复水冻干菌团
  2. 无菌操作将悬液转移至5~6mL厌氧增菌肉汤管中
  3. 可取0.5mL初级肉汤接种额外增菌管
  4. 37℃厌氧条件下培养24~48h

4.3 菌种保藏

  • 短期保藏：厌氧肉汤或Cooked Meat培养基，室温或2~8℃保存
  • 长期保藏：20%甘油硫乙醇酸盐肉汤冻存，-80℃或更低
  • 特殊提醒：产气荚膜梭菌为严格厌氧菌，操作全程需在厌氧环境或快速转移下完成

4.4 形态鉴别要点

  • 大杆菌，两端钝圆，革兰阳性（老龄培养物可转为阴性）
  • 无芽孢（体内条件），极少见芽孢
  • 无鞭毛，无动力（区别于肉毒梭菌等有动力的梭菌）
  • Nagler反应阳性
  • 暴烈发酵阳性
  • 触酶阴性

五、常见问题与排障

  • 厌氧培养不生长：厌氧系统密封不严或催化剂失效
  • Nagler反应阴性：卵黄乳液不新鲜或α毒素表达减弱
  • TSC琼脂黑色菌落不明显：亚硫酸盐含量不足
  • 需氧对照也生长：产气荚膜梭菌芽孢耐氧存活
  • 革兰染色假阴性：老龄培养物革兰反应逆转

六、权威数据来源

  • ATCC官方目录：https://www.atcc.org/products/13124
  • ATCC基因组门户：https://genomes.atcc.org/genomes/f7f82ca9bf8b4727
  • GB 4789.28-2013《食品安全国家标准 培养基和试剂的质量要求》
  • GB/T 4789.13-2003《食品卫生微生物学检验 产气荚膜梭菌检验》
  • ISO 7937:2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens
  • Thermo Scientific Culti-Loops Clostridium perfringens ATCC 13124

关于我们

杭州康氧医疗器械有限公司专注于ATCC标准菌株、ATCC细胞、DSMZ标准菌株、CMCC菌种、CICC菌种等各类微生物标准菌株的供应。我们的菌株直接源自ATCC官方保藏中心，特性稳定、数据权威可溯源，广泛应用于制药、食品、化妆品、环保及科研领域的质量控制与检测验证。

  • 官网：www.kystrains.com

免责声明

本文内容基于ATCC官方数据、国家标准GB 4789系列及ISO标准整理，仅供专业技术交流参考，不构成任何商业推荐或采购建议。菌株的储存、使用及操作应严格遵守实验室生物安全规范及相关法规要求。厌氧菌操作须在专业厌氧条件下进行，操作不当可能影响菌株活性及试验结果。具体产品信息请以ATCC官方网站（www.atcc.org）发布的最新资料为准。

posted @ 2026-08-10 16:36  杭州康氧医疗器械  阅读(1)  评论(0)    收藏  举报