ATCC 49247 流感嗜血杆菌：嗜血菌药敏试验质控的核心参考菌株

关键词：ATCC 49247、流感嗜血杆菌、药敏试验质控、CLSI M100、HTM培养基、嗜血杆菌药敏盘试验、β内酰胺酶阴性氨苄西林耐药

一、菌株基本信息

  • ATCC编号：49247
  • 菌种名称：流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）
  • 菌株名称：TD-4
  • 分离来源：肺炎男性患者的咳痰标本（76岁，美国马萨诸塞州伍斯特）
  • 分离时间：1984年1月
  • 革兰氏反应：阴性（G-）
  • 形态：小杆菌，多形性明显，有时呈丝状
  • 生物安全等级：BSL-2
  • 基因组测序：已完成全基因组测序
  • 保藏机构：ATCC（美国典型培养物保藏中心）
  • Preceptrol：是（ATCC优选质控菌株）

二、药典与标准中的定位

ATCC 49247 是CLSI公认的嗜血杆菌药敏试验质控参考菌株，在以下标准中被明确指定：

2.1 CLSI标准

  • CLSI M100：（抗菌药物敏感性试验执行标准）：Haemophilus influenzae ATCC 49247 被列为HTM培养基上肉汤微量稀释法MIC质控范围的标准菌株
  • CLSI M2：（抗菌药物药敏盘试验标准）：纸片扩散法质控指定该菌株
  • CLSI M7：（需氧细菌抗菌药物敏感性稀释试验方法）：MIC法质控指定该菌株
  • CLSI M6：（脱水Mueller-Hinton琼脂评估标准）：培养基性能质控

2.2 特殊耐药特性

ATCC 49247 具有重要的耐药谱特征：

  • β内酰胺酶阴性，氨苄西林耐药（BLNAR）：该菌株不含TEM型β内酰胺酶，但通过青霉素结合蛋白（PBP3）突变导致对氨苄西林天然耐药
  • 这一特性使其在验证HTM培养基能否正确检出BLNAR型耐药方面具有不可替代的价值

2.3 欧洲标准

  • EUCAST：同样推荐ATCC 49247作为Haemophilus influenzae药敏试验质控菌株

三、药敏试验质控中的应用要点

3.1 HTM培养基的质控验证

流感嗜血杆菌药敏试验必须使用专用培养基——嗜血杆菌测试培养基（HTM，Haemophilus Test Medium）。ATCC 49247 在HTM上的MIC质控范围（CLSI M100最新版）：

  • 抗菌药物：MIC质控范围（μg/mL）
  • 氨苄西林：2~8（BLNAR菌株）
  • 阿莫西林-克拉维酸：0.12/0.06~0.5/0.25
  • 头孢曲松：0.004~0.016
  • 美罗培南：0.03~0.12
  • 氯霉素：0.5~2
  • 四环素：0.12~1
  • 环丙沙星：0.004~0.016
  • 红霉素：不推荐（HTM上无可靠结果）

注意： 上述MIC范围为参考值，请以CLSI M100最新版发布数据为准。

3.2 纸片扩散法质控

ATCC 49247 在HTM琼脂上的抑菌圈直径质控范围：

  • 抗菌药物（纸片含量）：抑菌圈直径质控范围（mm）
  • 氨苄西林（10μg）：14~22（BLNAR）
  • 阿莫西林-克拉维酸（20/10μg）：18~26
  • 头孢曲松（30μg）：30~38
  • 氯霉素（30μg）：22~30

3.3 药敏试验操作关键注意事项

  1. 培养基必须用HTM：常规MHA不含流感嗜血杆菌生长所需的辅因子（X因子和V因子），药敏结果不可靠
  2. 接种量控制：0.5麦氏浊度标准，用HTM肉汤调节
  3. CO₂培养：5% CO₂环境下35℃培养16~18h读取结果
  4. 每日质控：实验室每日开展药敏试验时，应同步测试ATCC 49247，MIC或抑菌圈需落在CLSI规定范围内

四、培养与保藏技术要点

4.1 常规培养条件

  • 培养基：ATCC Medium 2167（HTM肉汤）/ ATCC Medium 814（GC琼脂+辅因子）
  • 培养温度：35~37℃
  • 培养时间：24~48h
  • 气体条件：5% CO₂，常规大气

4.2 复苏操作

  1. 按ATCC说明书打开冻干管
  2. 用单管#2167 HTM肉汤（5~6 mL），吸取0.5~1.0 mL复水冻干菌团
  3. 无菌操作转移悬液回肉汤管，混匀
  4. 取数滴悬液接种#814琼脂斜面或平板，以及额外的#2167肉汤管
  5. 37℃、5% CO₂条件下孵育24~48h

4.3 菌种保藏

  • 短期保藏：巧克力斜面，2~8℃，每周传代1次，传代不超过5代
  • 长期保藏：20%甘油HTM肉汤冻存，-80℃或更低，避免反复冻融
  • 关键提醒：流感嗜血杆菌对干燥和寒冷敏感，冻干保存开封后应立即复苏

4.4 形态鉴别要点

  • 巧克力平板上菌落小、圆形、光滑、灰白色、湿润
  • 革兰染色阴性小杆菌，多形性明显
  • 需要Ⅴ因子（NAD）和Ⅹ因子（高铁血红素）才能生长——在普通琼脂上不生长
  • 卫星现象阳性（在金葡菌周围生长更好）

五、常见问题与排障

  • 巧克力平板上不长：培养基Ⅴ/Ⅹ因子不足或加热过度破坏因子
  • 药敏MIC超出质控范围：HTM培养基质量不合格或接种浓度不准
  • CO₂条件对结果影响：5% CO₂下抑菌圈偏大
  • 卫星现象不明显：金葡菌接种位置或量不足
  • 复苏失败：冻干粉操作不当或保存不当

六、权威数据来源

  • ATCC官方目录：https://www.atcc.org/products/49247
  • CLSI M100 Ed33（2023）：Antimicrobial Susceptibility Testing Execute Standards
  • CLSI M07-A11：Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically
  • Jorgensen JH, et al. Multicenter evaluation of the use of Haemophilus test medium for broth microdilution antimicrobial susceptibility testing of Streptococcus pneumoniae and development of quality control limits. J Clin Microbiol. 1992
  • EUCAST Breakpoint Tables for interpretation of MICs

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免责声明

本文内容基于ATCC官方数据、CLSI标准及国际药典整理，仅供专业技术交流参考，不构成任何商业推荐或采购建议。菌株的储存、使用及操作应严格遵守实验室生物安全规范及相关法规要求。MIC质控范围请以CLSI M100最新版发布数据为准，本文所列范围为参考值。具体产品信息请以ATCC官方网站（www.atcc.org）发布的最新资料为准。

posted @ 2026-08-10 16:34  杭州康氧医疗器械  阅读(0)  评论(0)    收藏  举报